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一、图例：灵芝母种繁殖成灵芝栽培种过程：

二、一级菌种接种二级菌种、二级菌种接三级菌种的无菌操作规程：

1.接种前对接种箱（房）彻底清扫干净，并准备好接种工具、准备待接的灭好菌的培养基，然后对接种箱进行气雾灭菌或用离子风净化空气杀菌。

2.工作人员换好消毒的工作服、口罩等。双手用75%酒精擦拭消毒。

3.接种工具使用前，应火焰灼烧至无菌。棉塞试管口、瓶口部分不得与未灭菌物体接触，以防止杂菌侵染。灭菌后的工具要根据经验凉后使用，以免烫死菌种。

4.菌种管口、瓶口不能离开无菌区，（接种也必须在无菌区内进行）同时也不能离酒精灯太近，以避免烧死菌种。

5.接菌过程要快、准、稳，接种温度不宜过高（**不过28℃），高温度季节可采取降温措施。

6.接种过程中尽量避免人员走动，少说话，避免因空气流动而引起杂菌感染。

三、一级菌种转二级菌种的方法：

制作二级种的目的是为了扩大菌种数量满足生产需要，同时也使菌丝对培养的营养物质有适应能力进一步检查菌种优劣。一般一支一级种可扩5-8瓶二级种。

1.二级菌种培养料灭菌后，置于干净室内冷却备用。

2.将培养料进入接种室并对室内进行彻底处理（如气雾消毒或用离子风消毒等。）

3.接种前工作人员用75%酒精擦拭双手，同时擦拭一级菌种和二级菌种的容器外壁。

4.接种时，先按无菌操作规程，拔去试管胶塞，管口用火焰灼烧灭菌冷却后把待接的二级菌种料瓶拔去棉塞放于台面上。用接种铲铲取一块一级菌种移入二级菌种培养料中塞好塞，放到一边再进行下一个接种。

5.接好的二级菌种做好标记放入处理好的发菌室发菌。发菌温度22－28℃。

四、二级菌种扩接三级菌种方法：

同一级菌种扩繁二级菌种完全相同，不同的是，接种材料是用培养好的原种（二级菌种）扩接，每瓶接入枣粒大小块二级菌种即可，每瓶二级菌种可扩接栽培种（三级菌）50袋左右。

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